一种高效、稳定的可溶性原核表达载体的构建及应用

• 作者: 丛国正 常惠芸 林彤 独军政 邵军军 高闪电
• 来源期刊: 华北农学报
• 学科: 医学
• 关键词: 口蹄疫病毒 原核表达 可溶性 信号肽
• 年，卷（期）: 2009,（6）
• 页码范围: 46-49
• 页数: 4页
• 分类号: R392.11
• 字数: 3898字
• 语种: 中文

摘要

以O型口蹄疫病毒结构蛋白VP1基因重组克隆载体pGEM-OVP1为模板,设计表达引物,经PCR扩增获得上游带有PelB信号肽编码序列的VP1 C端编码区,将其克隆至该表达载体pET-30a(+)中,构建了可溶性原核表达载体pET-30a-PelB-VP1C.将VP1全长编码区替换VP1C,获得重组原核表达载体pET-30a-PelB-VP1.将两种重组质粒分别转化大肠杆菌工程菌株BL21-(DE3)-plysS,经IPTG诱导表达,实现了VP1全长及其C端的可溶性表达,以金属离子螯合层析法分别对表达的VP1及其C端融合蛋白进行纯化,SDS-PAGE显示纯化的目的蛋白分别在32 ku和20 ku处有单一目的条带,具有较高的纯度.Western blot 分析,VP1蛋白及其C端均可与牛O型口蹄疫病毒阳性血清反应.对重组菌株的连续传代实验证实了该可溶性表达载体的遗传稳定性,显示了该可溶性原核表达载体在蛋白可溶性表达中的应用价值.