一种新型原核融合表达载体的设计、构建及应用

• 作者: 余抒 刘艳青 宁亚蕾 张晓丽 毛旭虎 王庆旭 程琰 邹全明
• 来源期刊: 解放军检验医学杂志
• 关键词: EspA 融合表达载体 肠出血性大肠杆菌O157:H7
• 年，卷（期）: 2010,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 46-54
• 页数: 9页
• 语种: 中文

摘要

目的 利用EspA(肠出血性大肠杆菌O157:H7Ⅲ型分泌蛋白A)作为融合伴体分子,构建一种高效原核融合表达载体.方法 在EspA的羧基端设计-Linker,包括柔韧区,肠激酶酶切位点和多克隆位点.PCR分别扩增espA、Linker基因,利用重叠延伸PCR技术获得二者融合基因,T-A克隆后插入表达载体Pet-28a(+),构建高效原核表达载体-pEspA.分别将IL-24、GFP等六种基因克隆人pEspA,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导融合蛋白表达,SDS-PAGE检测融合蛋白.以EspA单克隆抗体亲和层析柱纯化融合蛋白,融合蛋白经肠激酶酶切后再通过Ni<'2+>亲和层析柱获得外源蛋白.分别利用MTT法和紫外光激发实验鉴定IL-24、GFP生物学活性.结果 构建的表达载体pEspA可高效表达外源目的蛋白,使本身不表达或表达量低的目的蛋白获得高效表达.先以EspA单克隆抗体亲和层析一步纯化获得高纯度的融合蛋白,融合蛋白经肠激酶酶切后再以Ni<'2+>亲和层析柱获得了外源蛋白,同时生物学活性实验显示纯化的IL-24、GFP具有较好的生物学活性.结论 成功构建了基于EspA的新型高效原核融合表达载体,为蛋白的融合表达及纯化又提供了一种可供选择的工具.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	邹全明	第三军医大学检验系临床微生物及免疫学教研室暨重庆市生物制药工程技术研究中心	258	1589	19.0	26.0
2	张晓丽	第三军医大学检验系临床微生物及免疫学教研室暨重庆市生物制药工程技术研究中心	19	78	6.0	7.0
3	毛旭虎	第三军医大学检验系临床微生物及免疫学教研室暨重庆市生物制药工程技术研究中心	87	417	12.0	16.0
4	宁亚蕾	第三军医大学检验系临床微生物及免疫学教研室暨重庆市生物制药工程技术研究中心	3	5	1.0	2.0
5	王庆旭	第三军医大学检验系临床微生物及免疫学教研室暨重庆市生物制药工程技术研究中心	7	28	3.0	5.0
6	余抒	第三军医大学检验系临床微生物及免疫学教研室暨重庆市生物制药工程技术研究中心	8	33	3.0	5.0
7	程琰	第三军医大学检验系临床微生物及免疫学教研室暨重庆市生物制药工程技术研究中心	1	0	0.0	0.0
8	刘艳青	第三军医大学检验系临床微生物及免疫学教研室暨重庆市生物制药工程技术研究中心	6	12	2.0	3.0