锦鲤疱疹病毒囊膜蛋白ORF59的克隆、分析及其主要B细胞表位区的原核表达

• 作者: 刘振兴 孟轩 林敏 柯浩 陈棠堂
• 来源期刊: 南方水产
• 学科: 生物学
• 关键词: 锦鲤疱疹病毒 囊膜蛋白 B细胞表位 原核表达
• 年，卷（期）: 2010,（4）
• 页码范围: 56-62
• 分类号: Q939.47
• 字数: 3440字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-2227.2010.04.010

摘要

从感染锦鲤疱疹病毒(Koi herpesvirus,KHV)的锦鲤(Cyprinus carpio koi)肾脏组织中提取DNA,通过PCR扩增了KHV ORF59基因.该基因全长411 bp,所编码的蛋白包含136个氨基酸,分子量14.3 kDa,等电点(PI) 6.91,有12 个潜在的O糖基化位点.此研究克隆的KHV ORF59基因第130位碱基由G突变为A,使其编码的第44位氨基酸由Ala突变为Thr.采用DNA Star 程序,在综合分析二级结构柔性区、蛋白的亲水性、表面可能性和抗原性指数的基础上,预测了KHV ORF59蛋白主要B细胞表位,并将其区段的编码序列与KHV ORF59 完整编码序列分别克隆入原核表达载体pET-32a(+),构建重组质粒pET32a-ORF59S和pET32a-ORF59C,转入大肠杆菌Rosetta菌株,IPTG诱导表达.SDS-PAGE及Western Blot分析显示,pET32a-ORF59S可以高效表达,表达的截短KHV ORF59蛋白主要以可溶性形式存在,采用His Bind Resin填料,层析纯化了该截短蛋白.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘振兴	广东省农业科学院兽医研究所广东省兽医公共卫生公共实验室	5	56	4.0	5.0
2	林敏	广东省农业科学院兽医研究所广东省兽医公共卫生公共实验室	5	63	5.0	5.0
3	孟轩	广东省农业科学院兽医研究所广东省兽医公共卫生公共实验室	2	41	2.0	2.0
4	柯浩	广东省农业科学院兽医研究所广东省兽医公共卫生公共实验室	12	136	7.0	11.0
5	陈棠堂		2	13	1.0	2.0