结核分枝杆菌Rv1168c蛋白的基因表达、纯化及结构分析

• 作者: 余晓丽 周晨俊 孙庆文 孙战强 张舒林 温子禄 王洪海 陈军
• 来源期刊: 微生物学报
• 学科: 医学
• 关键词: 结核分枝杆菌 Rv1168c 基因表达 蛋白纯化 圆二色谱
• 年，卷（期）: 2010,（7）
• 页码范围: 931-936
• 分类号: R392
• 语种: 中文

摘要

[目的]应用原核表达体系对结核分枝杆菌PPE蛋白家族Rv1168c进行高效表达,进一步进行蛋白纯化和结构分析.[方法]以结核分枝杆菌H37Rv基因组为模板,扩增Rv1168c基因,构建pET32a-Rv1168c重组质粒;转化重组质粒到大肠杆菌DH5α并在BL21(DE3)诱导表达,通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺电泳(SDS-PAGE)鉴定Rv1168c在大肠杆菌中的表达情况;Ni-NTA His* Bind Resin纯化重组蛋白Rv1168c;SDS-PAGE和质谱分析测定相对分子量后,用圆二色光谱(CD)和同源模建方法分析和检测重组蛋白Rv1168c的二级和三级结构.[结果]成功克隆了971 bp的目的基因Rv1168c,并获得了高纯度的重组蛋白Rv1168c.重组蛋白的分子量为51.5 kDa(含载体蛋白).25℃时重组蛋白Rv1168c的二级结构包括34.4%α螺旋,33.7%β转角,31.9%无规则卷曲,它的三维模型显示为(β/α)5结构.[结论]成功得到高纯度的重组目的Rv1168c蛋白,并初步进行了结构分析,为进一步对Rv1168c结构和功能研究奠定了基础.