基于CMV启动子构建CVB3感染性克隆载体的初步研究

• 作者: 凌焱 孙芳 张部昌 李玉霞 梁龙 汤洁 贾宏瑾 陈惠鹏
• 来源期刊: 军事医学科学院院刊
• 学科: 生物学
• 关键词: 柯萨奇病毒 CVB3 感染性克隆 序列分析
• 年，卷（期）: 2010,（4）
• 页码范围: 356-360
• 分类号: Q785
• 字数: 4987字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-9960.2010.04.016

摘要

目的 利用CMV启动子构建CVB3感染性克隆载体.方法 将质粒pcDNA3.1(+)的CMV启动子下游区域通过PCR技术替换成设计好的多克隆位点区,分别插入PCR合成的HdvRz核心序列和polyA尾片段,形成框架载体pc-H-A,通过瞬时转染HeLa细胞初步鉴定pc-H-A的可用性;用本室保存的CVB3(nancy株)感染HeLa细胞,取感染液上清提取病毒RNA,利用长链RT-PCR和长链PCR技术反复优化条件扩增病毒基因组全长片段,将此全长片段克隆至设计好的框架载体pc-H-A中,筛选阳性克隆,并对其进行测序鉴定.结果 与结论构建了带有CMV启动子的框架载体pc-H-A并初步鉴定了该载体可用,利用此框架载体构建了与基因库中序列相似性为99%的CVB3全长cDNA克隆pc-CVB3-H-A.该研究为进一步鉴定所构建的CVB3全长克隆的感染性提供了基础,并为后续在病毒学研究和基因治疗方面的研究提供了手段.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈惠鹏		143	885	15.0	23.0
2	张部昌	安徽大学生命科学学院	82	550	12.0	20.0
3	梁龙	军事医学科学院生物工程研究所	33	293	8.0	16.0
4	凌焱	军事医学科学院生物工程研究所	14	66	4.0	7.0
5	李玉霞	军事医学科学院生物工程研究所	13	61	5.0	7.0
6	孙芳	军事医学科学院生物工程研究所	3	27	2.0	3.0
7	贾宏瑾	军事医学科学院生物工程研究所	1	3	1.0	1.0
11	汤洁	军事医学科学院生物工程研究所	1	3	1.0	1.0