盘基网柄菌allC的克隆、表达和多克隆抗体的制备

• 作者: 侯连生 刘伟 陈能星 魏晓静
• 来源期刊: 华东师范大学学报（自然科学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 盘基网柄菌 尿囊酸酶 原核表达 蛋白纯化 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2010,（4）
• 页码范围: 77-84
• 分类号: Q255
• 字数: 4599字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-5641.2010.04.009

摘要

运用RT-PCR技术从盘基网柄菌(Dictyostelium discoideum)总mRNA中克隆到了尿囊酸酶基因(allC),该基因编码区开放读框长1 100 bp,编码的蛋白约42 kD.由于是在野生型和突变型细胞中差异表达的片段,表明该基因在盘基网柄菌多细胞发育中起到重要作用,因此将allC克隆入融合表达载体pET-32a(+),在大肠杆菌E.coli BL21(DE3)中进行诱导表达带有6个组氨酸标签的尿囊酸酶(ALC)融合蛋白,经镍柱亲和层析,获得了电泳纯蛋白.用纯化的融合蛋白免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体.ELISA 测得制备的抗ALC蛋白的多克隆抗体的效价可达1 ∶ 64 000,Western Blotting检测证明该抗体有较强的针对ALC 蛋白的专一性.这些数据表明重组质粒表达的ALC 融合蛋白具有良好的抗原性,制备ALC的多克隆抗体有良好特异性和效价,能够满足针对ALC 免疫印迹和细胞内定位检测等实验要求, 为深入研究ALC蛋白在盘基网柄菌多细胞发育的功能作用提供了有力工具.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	侯连生	华东师范大学生命科学学院	35	102	5.0	8.0
2	刘伟	华东师范大学生命科学学院	58	720	13.0	25.0
3	陈能星	华东师范大学生命科学学院	3	5	2.0	2.0
4	魏晓静	华东师范大学生命科学学院	1	3	1.0	1.0