N-乙酰-D-葡萄糖胺-2-差向异构酶基因的克隆、表达及产物纯化

• 作者: 余云彦 刘乃华 唐琴琴 张卫星 晏永波 李校堃 林绍强 闫欣欣
• 来源期刊: 温州医学院学报
• 学科: 医学
• 关键词: N-乙酰-D-萄糖胺-2-差向异构酶 基因 克隆 纯化 猪
• 年，卷（期）: 2010,（6）
• 页码范围: 531-535
• 分类号: R9
• 字数: 3887字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-2138.2010.06.001

摘要

目的:从猪肾中提取RNA,从中克隆出N-乙酰-D-葡萄糖胺-2-差向异构酶(GNE)基因,并在大肠杆菌E.coli BL21(DE3)中表达.方法:从猪肾中提取总RNA,通过RT-PCR克隆出GNE基因,经测序,感受态大肠杆菌E.coli DH5a转化,质粒抽提,鉴定以及大肠杆菌BL21(DE3)转化表达,通过His-tag亲和纯化(Ni Sepharose 6 Fast Flow),G-25柱脱盐,SDS-PAGE电泳检测.结果:RNA提取物经紫外分光光度计检测OD260/OD280=1.77,说明无明显的蛋白质和酚污染.RT-PCR扩增目的片段,测序证明该基因的ORF为1 206 bp,编码402个氨基酸组成的酶蛋白(GNE).SDS-PAGE显示,纯化蛋白为45 kD的单一条带,与基因序列推测值一致.结论:GNE基因已被成功地克隆和表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李校堃	温州医学院药学院	125	899	15.0	21.0
2	林绍强	温州医学院药学院	17	63	5.0	7.0
3	闫欣欣	温州医学院药学院	3	5	2.0	2.0
4	余云彦	温州医学院药学院	1	0	0.0	0.0
5	张卫星	温州医学院药学院	2	0	0.0	0.0
6	唐琴琴	温州医学院药学院	1	0	0.0	0.0
7	刘乃华	温州医学院药学院	1	0	0.0	0.0
8	晏永波	温州医学院药学院	2	4	1.0	2.0