人分化抑制因子3重组腺病毒的制备及鉴定

• 作者: 庞小娟 张弛 彭薇 李晓军 秦浚川 罗冰 臧宇辉 虞伟 赵晓琴 陈芳芳
• 来源期刊: 临床检验杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 细胞分化抑制因子3 重组腺病毒 滴度测定 表达
• 年，卷（期）: 2010,（1）
• 所属期刊栏目: 研究生园地
• 页码范围: 59-62
• 页数: 4页
• 分类号: Q784
• 语种: 中文

摘要

目的 构建人细胞分化抑制因子3(Id3)重组腺病毒载体,制备并鉴定人Id3重组腺病毒,为研究Id3基因在细胞中的表达及其对细胞功能的影响奠定基础.方法 以pUC57-Id3为模板扩增人Id3基因,克隆到质粒pUC18中,pUC18-Id3经EcoR Ⅰ和Hind Ⅲ双酶切补平之后与载体pAxCAwtit连接,构建重组粘粒载体pAxCAwtit-Id3,包装试剂盒包装重组粘粒,转染大肠埃希菌,鉴定正确后大量制备重组pAxCAwtit-Id3,经酶切线性化后,用脂质体法转染HEK293A细胞,包装成重组腺病毒Ad-Id3,制备高滴度的重组腺病毒Ad-Id3,利用TCID_(50)法计算重组腺病毒滴度,经RT-PCR及western blot检测Id3基因的表达.结果 Id3基因成功克隆到腺病毒载体中,重组腺病毒滴度为1.8×10~(10)PFU/ml,用RT-PCR检测到Id3基因的转录产物,westernblot检测到Id3在A549细胞中的高水平表达.结论 成功构建Ad-Id3重组腺病毒载体,并在A549细胞中得到高效表达.