豹蛙酶的基因克隆及其在大肠杆菌中的表达

• 作者: 张来颖 陈劲春
• 来源期刊: 北京化工大学学报（自然科学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 豹蛙酶 大肠杆菌 基因克隆 结构鉴定
• 年，卷（期）: 2010,（3）
• 所属期刊栏目: 生物技术与环境工程
• 页码范围: 102-105
• 分类号: Q78
• 字数: 2825字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-4628.2010.03.021

摘要

根据豹蛙酶的氨基酸序列,采用大肠杆菌偏爱密码子设计引物,重叠延伸PCR法合成出目的基因,约350bp.将得到的片断克隆于载体pGEM-T中并测序,再连接至表达载体pET-22b(+)中,重组质粒转入大肠杆菌Rosetta中.转化的重组大肠杆菌用终浓度1mmoL/L的IPTG诱导外源基因表达,采用Tricine-SDS-PAGE系统,分析目标蛋白主要以包涵体形式存在,其质量分数可达48.8%.利用液相电喷雾串联质谱方式(LC-ESI-MS/MS)鉴定蛋白,通过LCQ DECA XP Plus系统进行蛋白序列的分析,其覆盖率达到35%,确定了其蛋白质一级结构的正确性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈劲春	北京化工大学生命科学与技术学院	53	248	9.0	13.0
2	张来颖	北京化工大学生命科学与技术学院	1	0	0.0	0.0