人对氧磷酶1基因重组腺相关病毒载体的构建及表达

• 作者: 宋柳江 王峰 田晶 薛金凤 谭孟群 赵霏
• 来源期刊: 广州医学院学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 腺相关病毒 动脉粥样硬化 对氧磷酶1 内皮祖细胞
• 年，卷（期）: 2010,（5）
• 所属期刊栏目: 实验技术
• 页码范围: 57-62
• 分类号: Q75|Q78
• 字数: 3680字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1008-1836.2010.05.017

摘要

目的:构建带有人对氧磷酶1(hPON1)基因的重组腺相关病毒(rAAV)载体,并检测其转染大鼠骨髓内皮祖细胞(EPCs)后hPON1的表达.方法:提取流产胎儿肝脏的总RNA,RT-PCR获得cDNA,设计引物通过PCR获得PON1基因片段,将其与pGEM-T Easy载体连接,将PON1基因片段切下,插入到质粒pAAV-IRES-GFP的多克隆位点,获得质粒pAAV-PON1-IRES-GFP,经酶切和测序鉴定.包装的病毒rAAV-PON1用斑点杂交检测滴度,并用其转染EPCs检测hPON1在mRNA水平的表达.结果:pAAV-PON1-IRES-GFP酶切和测序结果完全正确.斑点杂交检测病毒的滴度为1.7×1010v.g/mL,RT-PCR结果显示病毒转染EPCs后存在hPON1的表达.结论:成功构建了pAAV-PON1-IRES-GFP质粒,包装出较高滴度的rAAV-PON1,并且转染EPCs后可以检测到hPON1表达.