红松SRAP-PCR反应体系的建立及优化

• 作者: 冯富娟 张冬东 赵丹 隋心
• 来源期刊: 实验室研究与探索
• 学科: 农学
• 关键词: 红松 正交设计 反应体系 SRAP-PCR 单因子试验
• 年，卷（期）: 2010,（7）
• 页码范围: 14-18
• 分类号: S791.247
• 字数: 4617字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1006-7167.2010.07.004

摘要

相关序列扩增多态性(Sequence-Related Amplified Polymorphism,SRAP)是对ORFs(Open Reading Frames)进行扩增的一种新型的基于PCR的标记方法.以CTAB法提取的红松针叶DNA为模板,应用单因子试验及L16 (45)正交试验系统分析了DNA模板浓度、Mg2+浓度、dNTPs浓度、引物浓度、Taq酶浓度等对SRAP-PCR扩增结果的影响.确定了PCR的最佳反应体系为:20 μL体系中,1×PCR buffer 2 μL、DNA模板40～100 ng,Mg2+ 2.5mmol/L,dNTPs 0.15 mmol/L,引物0.15 μmol/L ,Taq酶1.5 U.PCR最优的扩增程序为:进行35个循环,前5个循环中 94 ℃变性1 min,35 ℃复性1 min ,延伸30 s;后30个循环中94 ℃变性1 min,50 ℃复性1 min,72 ℃延伸1 min;最后72 ℃延伸7 min,4 ℃保存.在此反应体系下,所扩增谱带清晰、稳定、多态性高,为进行红松不同种源间遗传分化以及构建遗传图谱等内容的研究奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	冯富娟		33	656	14.0	25.0
2	隋心		5	37	3.0	5.0
3	张冬东		3	43	3.0	3.0
4	赵丹		18	73	6.0	8.0