大鼠癌钙调蛋白基因原核表达载体的构建及表达

• 作者: 崔志利 朱彤 石燕红 胡丹 薛峥 马丽娜
• 来源期刊: 中华眼视光学与视觉科学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 癌钙调蛋白 克隆 基因表达 大鼠
• 年，卷（期）: 2010,（4）
• 页码范围: 281-285
• 分类号: R77
• 字数: 4105字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1674-845X.2010.04.010

摘要

目的 在原核表达载体中构建癌钙调蛋白(OM)基因,并对构建的原核表达质粒进行表达和鉴定.方法 取SD大鼠6只,提取腹腔巨噬细胞并活化,提取总RNA,设计引物对OM基因进行RT-PCR扩增.通过中间载体pUC57进行目的 基因克隆,将阳性克隆质粒酶切,与原核表达载体pET-22b(+)连接,转化入大肠杆菌感受态细胞DH5α,菌检PCR筛选阳性克隆后小量提取质粒,送样行核苷酸序列分析鉴定.成功构建的原核表达质粒,在大肠杆菌BL21中经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导重组体的表达,并用Western blot鉴定表达产物.结果 琼脂糖凝胶电泳获得目的 基因OM,大小为350 bp左右,与预期的目的 基因大小一致.构建的重组质粒pET-22b(+)/OM菌检PCR获得长度为500 bp左右的阳性克隆,与预期大小一致.抽提质粒经核苷酸序列分析后表明,克隆的片段与OM基因序列一致.在IPTG的诱导下,重组体表达出分子量约11.7 kD的表达产物,Western blot结果证实其为目的 蛋白.结论 实验成功构建了OM基因原核表达载体及其表达,为该蛋白促进视神经损伤后再生的研究奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	胡丹	第四军医大学西京医院眼科全军眼科研究所	44	228	9.0	12.0
2	崔志利	第四军医大学西京医院眼科全军眼科研究所	12	74	5.0	8.0
3	薛峥	第四军医大学西京医院眼科全军眼科研究所	2	3	1.0	1.0
4	石燕红	第四军医大学西京医院眼科全军眼科研究所	2	2	1.0	1.0
5	朱彤	第四军医大学西京医院眼科全军眼科研究所	3	5	2.0	2.0
6	马丽娜	第四军医大学西京医院眼科全军眼科研究所	7	14	2.0	3.0