慢病毒表达质粒pLenti-IL-1ra-IRES-GFP的构建及其在NIH3T3细胞中的表达

• 作者: 徐艳 李松 束为 石小丹 苏毅
• 来源期刊: 牙体牙髓牙周病学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: IL-1ra 慢病毒表达质粒 牙周炎 基因治疗
• 年，卷（期）: 2010,（12）
• 页码范围: 679-683
• 页数: 5页
• 分类号: R780.2
• 语种: 中文

摘要

目的:构建携带人白细胞介素1受体拮抗剂(IL-1ra)的慢病毒表达质粒pLenti-IL-1ra-IRES-GFP,并检测其在NIH3T3细胞中的表达.方法:采用PCR技术从含有人IL-1ra基因的质粒pEGFP-NI-IL-1ra中扩增目的基因IL-1ra,并将该基因克隆至慢病毒表达质粒pLenti,PCR及DNA测序来鉴定构建的重组质粒pLenti-IL-1ra.从质粒PMIG中切取IRES-GFP基因片段,插入鉴定正确的质粒pLenti-IL-1ra中以构建重组质粒pLenti-IL-1ra-IRES-GFP.将构建成功的慢病毒表达质粒pLenti-IL-1ra-IRES-GFP、包装质粒△8.91、包膜质粒pVSVG共转染293T细胞.获取携带IL-1ra基因的重组慢病毒Lenti-IL-1ra-IRES-GFP,并感染NIH3T3细胞.荧光倒置显微镜下观察荧光蛋白的表达.灭瘟素(Blasticidin)筛选15d,RT-PCR检测目的基因的表达,ELISA检测目的蛋白的表达.结果:PCR及DNA测序结果均表明人IL-1ra基因与质粒pLenti正确重组;IRES-GFP基因经PCR鉴定已成功插入质粒pLenti-IL-1ra;三质粒共转染293T细胞可获得重组慢病毒.慢病毒感染NIH3T3细胞后,荧光倒置显微镜下能直接观察荧光蛋白的表达,RT-PCR和ELISA分别检测到IL-1ra在基因水平和蛋白水平的表达.结论:成功构建了携带人IL-1ra基因的慢病毒表达质粒pLenti-IL-1ra-IRES-GFP,并获得了稳定表达目的蛋白人IL-1ra的NIH3T3细胞系,为牙周炎基因治疗的进一步研究奠定了实验基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	徐艳		84	297	9.0	13.0
2	苏毅		3	5	1.0	2.0
3	束为		16	33	4.0	4.0
4	李松		8	12	2.0	3.0
5	石小丹		1	0	0.0	0.0