一种含双歧杆菌种属特异性复制子的新型大肠杆菌-双歧杆菌穿梭质粒的构建

• 作者: 周梅 张志豹 李五岭 李会娟 李载权 杨业鹏 石屹
• 来源期刊: 中国生物化学与分子生物学报
• 学科: 医学
• 关键词: 双歧杆菌 复制子 穿梭质粒 转化
• 年，卷（期）: 2010,（9）
• 页码范围: 871-877
• 页数: 7页
• 分类号: R73|Q939.13
• 语种: 中文

摘要

目前,双歧杆菌的转化是一个技术难题,与大肠杆菌等宿主菌的高转化效率不同,采用普通的原核质粒无法转化双歧杆菌.为此,本文提出双歧杆菌转化对质粒复制子具有"种属特异性"要求,并通过构建含有双歧杆菌特异复制子的新型穿梭质粒,以求解决这一难题.首先从GenBank获取长双歧杆菌隐性质粒pMB1的序列信息,采用Overlap-PCR方法获得其全长DNA,作为拟构建质粒的复制子;继而采用重组技术,将其与pMK4质粒片段(含大肠杆菌复制子pUC和抗氯霉素基因Cat)重组,构建大肠杆菌-双歧杆菌穿梭质粒;用电穿孔法将重组质粒转化双歧杆菌,通过观察不同电转参数下的转化效率,选择双歧杆菌转化的最佳条件.结果,成功获得全长1899 bp的pMB1复制子并构建成功含有pMB1和pUC双复制子的原核重组质粒,经酶切和测序鉴定正确,命名为pCMB1.以重组质粒成功转化了长双歧杆菌NCC 2705和NQ 1501,而其它3种野生型双歧杆菌(包括1株长双歧杆菌)未能转化成功.结论:质粒中含有双歧杆菌种属特异的复制子是实现双歧杆菌转化的必要条件;即使是含有特异复制子的质粒也只能转化有限数量种型甚至有限数量种株的双歧杆菌;选择最佳电转化条件能显著提高转化效率.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李会娟		34	234	9.0	14.0
2	李载权		19	232	6.0	15.0
3	杨业鹏		11	51	4.0	6.0
4	周梅		8	34	4.0	5.0
5	李五岭		5	10	2.0	3.0
6	石屹		1	0	0.0	0.0
7	张志豹		1	0	0.0	0.0