牛轮状病毒VP4基因与LTB基因的融合表达及免疫原性研究

• 作者: 仲跻峰 何洪彬 刘晓 南晓伟 杨宏军 杨少华 王长法 申之义 高运东
• 来源期刊: 西南农业学报
• 学科: 农学
• 关键词: 牛轮状病毒 融合基因 原核表达 免疫原性
• 年，卷（期）: 2010,（1）
• 所属期刊栏目: 动物科学
• 页码范围: 206-209
• 页数: 4页
• 分类号: S851.34~+7.1
• 字数: 2518字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-4829.2010.01.047

摘要

PCR扩增轮状病毒VP4基因和大肠杆菌LTB基因编码区,将其克隆至pET32a载体上,构建pET32a-VP4-LTB质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3),PCR、酶切鉴定后进一步测序,测序结果表明融合基因片段由2637 bp组成,为编码879个氨基酸残基的多肽.经IPTG诱导和SDS-PAGE检测发现表达产物分子量约为118.9 KD,以包涵体的形式存在.融合蛋白经镍离子螯合次氨基三乙酸(Ni-NTA)亲和层析纯化后免疫小鼠,结果所产生的抗体效价高于单独VP4蛋白的免疫结果但差异不显著(P>0.5),但与对照组相比差异显著.表明所表达的融合蛋白具有较好的免疫原性,为研制牛轮状病毒亚单位疫苗奠定了基础.