VEGF165基因重组腺病毒载体的构建及其促血管形成作用

• 作者: 吕海涛 孙凌 杨吉成 盛伟华 谢宇锋 贾红亮
• 来源期刊: 中国血液流变学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 血管内皮生长因子165 腺病毒载体 表达
• 年，卷（期）: 2010,（1）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 22-26,封2
• 分类号: R318
• 字数: 4445字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-881X.2010.01.007

摘要

目的 构建携带人血管内皮细胞生长因子165(VEGF165)基因的腺病毒表达载体(Ad-VEGF165),并观察其感染QBI-293A靶细胞后日的基囚的表达及促进血管形成的作用.方法 以含有VEGF165基因片段的pSV-K3-VEGF165质粒为模板,PCR扩增获得的VEGF165目的 片段(Xho l、EcoR V)亚克隆至GFP标记的pAdTrack-CMV载体中构建重组转移质粒pAdTrack-CMV-VEGF165,行PCR、双酶切和DNA测序鉴定.将测序正确的pAdTrack-CMV-VEGF165质粒经Pine I线性化后与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1共转化BJ5183细菌,获得同源重组腺病毒质粒pAdEasy-1-pAdTrack-CMV-VEGF165(pAd-VEGF165).再经Pac I线性化后用脂质体转染QBI-293A包装细胞,通过多轮扩增和氯化铯密度梯度离心纯化获得Ad-VEGF165重组腺病毒.RT-PCR和ELISA检测腺病毒介导的外源性VEGF165基因在QBI-293A细胞中的转录和表达.将孵育8d的生长状态良好的鸡胚随机分成Ad空载体腺病毒组、Ad-VEGF165重组腺病毒组、NS组.采用鸡胚尿囊膜(CAM)法检测VEGF165重组腺病毒促进尿囊膜血管形成活性.结果 PCR、双酶切和测序鉴定结果 证实成功构建了pAdTrack-CMV VEGF165重组转移质粒,并获得了高滴度的Ad-VEGF165重组腺病毒,其病毒效价可达2×1010pfu/mL.Ad-VEGF165感染后,QBI-293A细胞中的VEGF165含量较QBI-293A细胞对照组和Ad空病毒感染组均明显升高(P<0.05).Ad-VEGF165组与Ad.空载体组和NS组比较,CAM三级分支血管牛长更旺盛,毛细血管更丰富(p<0.05).结论 成功获得了携带人VEGF165基因的腺病毒表达载体,具有明显的促CAM血管形成活性,为进一步开展VEGF165基因修饰干细胞的应用研究奠定了实验基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吕海涛	苏州大学附属儿童医院心内科	69	192	9.0	10.0
2	孙凌	苏州大学附属儿童医院心内科	44	92	5.0	7.0
3	杨吉成	苏州大学基础医学系细胞与分子生物学教研室	164	943	16.0	20.0
4	盛伟华	苏州大学基础医学系细胞与分子生物学教研室	129	700	15.0	18.0
5	谢宇锋	苏州大学基础医学系细胞与分子生物学教研室	51	324	11.0	15.0
6	贾红亮	苏州大学附属儿童医院心内科	3	3	1.0	1.0