携带人血管内皮生长因子165基因的复制缺陷型腺病毒载体的构建和鉴定

• 作者: 丁士芳 冯进波 刘春喜 周炜 姜虹 王旭平 王荣
• 来源期刊: 实用医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 血管内皮生长因子类 腺病毒载体
• 年，卷（期）: 2009,（3）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 342-344
• 页数: 3页
• 分类号: R3
• 字数: 2629字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1006-5725.2009.03.003

摘要

目的:构建携带人血管内皮生长因子(VEGF)165基因的重组腺病毒载体.方法:应用EcoR Ⅰ和Xba Ⅰ酶切质粒PDC-VEGF和PDC315,连接DNA目的片段后转化大肠杆菌DH5a构建重组质粒PDC315-VEGF,对重组质粒进行酶切分析和测序鉴定.通过脂质体将质粒PDC315-VEGF与质粒pBHGE3共转染293细胞获取重组腺病毒,以重组腺病毒DNA为模板,PCR鉴定构建的重组腺病毒.扩增、浓缩纯化重组腺病毒,微量滴定法测定腺病毒滴度.结果:通过连接反应构建重组质粒PDC315-VEGF,酶切分析和测序证明构建正确.经细胞内同源重组构建携带人VEGF165基因的重组腺病毒,PCR扩增421 bp VEGF165片段,证实VEGF165基因成功克隆到复制缺陷型腺病毒载体,腺病毒滴度为5.0×109pfu/mL.结论:通过双质粒细胞同源重组,生产携带人VEGF165基因的重组腺病毒,为动物试验奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	丁士芳		27	153	7.0	11.0
2	周炜	山东大学齐鲁医院放射科	19	72	5.0	8.0
3	冯进波		6	26	4.0	5.0
4	王旭平		5	16	3.0	3.0
5	姜虹		3	6	1.0	2.0
6	刘春喜		4	12	2.0	3.0
7	王荣		4	12	2.0	3.0