人可溶性TRAIL基因的克隆及其在毕赤酵母中的重组表达

• 作者: 万琳 刘珊 卢晓风 李莹莹 杨浩 蔡华伟
• 来源期刊: 生物医学工程学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: TRAIL 细胞凋亡 肿瘤治疗 毕赤酵母
• 年，卷（期）: 2010,（6）
• 页码范围: 1307-1311,1326
• 页数: 6页
• 分类号: Q-3
• 语种: 中文

摘要

TRAIL是肿瘤坏死因子TNF家族成员,对肿瘤细胞具有高效和选择性杀伤活性,可能发展为新型抗肿瘤药物.基因重组表达是生产蛋白药物的重要手段.本文首先通过PCR扩增获得人可溶性TRAIL(114～281氨基酸组成的片段)基因,然后将其插入毕赤酵母表达载体pPIC9K中进行表达.结果发现,经G418筛选获得的高拷贝转化子,在含有3 %甲醇的BMMY培养基中,人可溶性TRAIL获得高效分泌表达.表达产物经Ni-Agarose 亲和层析,纯度大约为80%,产量可达1～2 mg/L.细胞毒性实验表明,0.05 μg/ml可溶性TRAIL对白血病细胞Jurkat有很强的杀伤活性,细胞存活率只有10%.0.1 μg/ml TRAIL可对人肺癌细胞A549显示剂量依赖的杀伤作用;当TRAIL浓度达到1 μg/ml时,细胞存活率大约为30%.而在测试的浓度范围内,可溶性TRAIL对人皮肤成纤维细胞HSF均无明显细胞毒作用,表明毕赤酵母表达的人可溶性TRAIL对肿瘤细胞的杀伤有选择性.该表达体系的建立,为进一步利用毕赤酵母大量生产人可溶性TRAIL和基于人TRAIL的新型融合蛋白奠定了基础.