转录因子E2F-1基因RNA干扰慢病毒载体的构建与鉴定

• 作者: 李雷 王晓通 肖强 谢玉波 钱倩
• 来源期刊: 广西医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 慢病毒载体 E2F-1 RNAi
• 年，卷（期）: 2010,（2）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 165-168
• 分类号: R735.2
• 字数: 2957字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-930X.2010.02.001

摘要

目的:构建细胞周期相关转录因子E2F-1 RNA干扰(RNAi)慢病毒表达载体.方法:选取E2F-1基因的19 nt特异性序列,设计针对E2F-1的shRNA序列,应用基因重组技术克隆到pLentiLox 3.7(pLL 3.7)慢病毒表达载体中,Xba I和 Not I进行双酶切和DNA测序鉴定重组克隆,在脂质体的介导下将慢病毒的混合包装载体质粒和包含E2F-1基因RNAi的重组慢病毒载体共转染293FT细胞,包装成病毒48 h后,收集病毒颗粒,孔稀释法测定病毒滴度.结果:双酶切证实shRNA正确插入慢病毒载体,DNA测序证实插入的序列正确;293FT细胞包装E2F-1基因RNAi的重组慢病毒载体成功;收集的细胞培养上清液中,病毒的滴度为5×107 TU/mL.结论:成功构建人E2F-1基因RNAi慢病毒载体,为研究E2F-1对于胃癌生长的影响提供了稳定的转染细胞载体.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王晓通	广西医科大学第七附属医院神经外科	26	101	6.0	8.0
2	李雷	广西医科大学第七附属医院神经外科	27	95	6.0	7.0
3	钱倩	广西医科大学第七附属医院神经外科	6	30	4.0	5.0
4	谢玉波	广西医科大学第一附属医院麻醉科	154	576	10.0	13.0
5	肖强	广西医科大学第七附属医院神经外科	104	361	9.0	11.0