人CD52基因的克隆及稳定转染细胞系的建立

• 作者: 刘友 刘红芹 屈浩 张宇光 朱卫彬 石琳 黄丽华
• 来源期刊: 中国生物制品学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: CD52基因 真核表达 转染 CHO细胞
• 年，卷（期）: 2010,（5）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 471-474
• 分类号: Q789|R392-33
• 语种: 中文

摘要

目的 克隆人CD52基因,构建真核表达载体,并在CHO细胞中稳定表达.方法 提取人Hut-78细胞总RNA,采用RT-PCR法扩增CD52基因,定向克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+),构建重组表达质粒pcDNA3.1(+)/CD52,通过脂质体法转染CHO细胞,建立稳定转染的细胞系CHO-CD52.采用RT-PCR、免疫荧光组化技术及流式细胞术检测目的基因和蛋白的表达.结果 RT-PCR扩增得到186 bp的DNA片段.重组表达质粒pcDNA3.1(+)/CD52经PCR、双酶切及测序证明构建正确.CHO-CD52细胞经RT-PCR分析,可见186 bp的目的基因条带;经免疫荧光检测,可见绿色荧光分布;经流式细胞术分析,阳性细胞百分率及荧光平均值分别为98.18和:193.56,.结论 已成功克隆了人CD52基因,并建立了稳定转染的CHO细胞系,为CD52单克隆抗体的制备及抗体药物的开发奠定了基础.