罗非鱼免疫前后白细胞cDNA差减文库的构建及鉴定

• 作者: 余晓丽 张彬 李莉萍 李超 梁万文 陈明 陈福艳 雷爱莹 黄婷 黄维义
• 来源期刊: 西南农业学报
• 学科: 农学
• 关键词: 罗非鱼 链球菌 白细胞cDNA 差减文库 抑制性差减杂交(SSH)技术
• 年，卷（期）: 2010,（4）
• 页码范围: 1286-1292
• 分类号: S965.316
• 字数: 5598字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-4829.2010.04.062

摘要

为筛选罗非鱼链球菌疫苗免疫前后白细胞表达变化基因及探讨鱼类白细胞免疫机理,利用抑制性差减杂交(SSH)技术,以链球菌疫苗免疫前后罗非鱼白细胞cDNA为材料,构建了罗非鱼免疫前后正、负2个cDNA差减文库,并采用地高辛(DIG)标记差减文库cDNA作为探针,进行差异表达片段的筛选鉴定.结果显示:2个文库重组率均在90 %以上,插入片段在300～900 bp,接头连接效率超过50 %,差减效率非常高效,阳性率均超过70 %.杂交筛选后正、负文库各挑选30个阳性克隆进行测序组装聚类,正、负文库各获得16和18条非冗余EST(unigene),所得序列经GenBank同源性分析,正、负文库各有10和11条unigene获得功能注释,且各有6和7条unigene没有同源性匹配,为未知新基因.