人PSCA真核表达载体的构建及表达

• 作者: 于继云 任杰 江乐 王伟 王宇 肖毅 阎瑾琦 高江平
• 来源期刊: 军医进修学院学报
• 学科: 医学
• 关键词: 前列腺,干细胞,抗原 基因表达 293T细胞
• 年，卷（期）: 2010,（6）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 607-609
• 分类号: R34
• 字数: 2257字
• 语种: 中文

摘要

目的 构建含有信号肽及FLAG标签的人前列腺干细胞抗原(PSCA)真核表达载体,并在人胚肾293T细胞中进行表达.方法 通过PCR方法获得SIG-FLAG基因片段及人PSCA基因片段,插入到真核表达载体pIRES-neo中.构建的重组质粒pIRES-neo-sig-FLAG-PSCA转染293T细胞,利用流式细胞仪、免疫荧光及RT-PCR方法检测其表达情况.结果 PCR扩增出的SIG-FLAG及PSCA基因测序正确,酶切鉴定证明重组质粒pIRES-neo-sig-FLAG-PSCA构建成功;检测结果显示重组质粒pIRES-neo-sig-FLAG-PSCA在293T细胞中得到表达.结论 成功构建了重组质粒pIRES-neo-sig-FLAG-PSCA.且在293T细胞中能有效表达,为后续转人PSCA基因细胞系的构建工作奠定了基础.