携带靶向干扰小鼠早期生长反应基因1短发夹RNA的慢病毒载体转染小鼠视网膜的干扰效率研究

• 作者: 刘双珍 文丹 王沙 蒋晶晶
• 来源期刊: 中华生物医学工程杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 早期生长反应基因1 RNA干扰 转染 慢病毒载体 基因表达调控
• 年，卷（期）: 2011,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 115-119
• 分类号: R378.2
• 字数: 3716字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1674-1927.2011.02.004

摘要

目的 构建携带绿色荧光蛋白(GFP)和靶向干扰早期生长反应基因1(Egr-1)短发夹RNA(shRNA)共表达的慢病毒载体,转染小鼠视网膜组织,观察其对Egr-1基因的干扰效率.方法 针对已经筛选确定的Egr-1基因shRNA有效靶序列,构建携带GFP和靶向干扰Egr-1 shRNA的慢病毒载体LV-shRNA(Egr-1).15日龄C57BL/6小鼠完全随机法分为实验组和阴性对照组,每组10只.LVshRNA(Egr-1)慢病毒载体经玻璃体腔注射转染至实验组小鼠右眼内,不针对任何特异基因的LV-NC 慢病毒载体通过同样的转染途径转染至阴性对照组小鼠右眼内,实验组及阴性对照组小鼠左眼不做任何处理设为空白对照组.2周后荧光显微镜下观察转染情况,实时定量PCR(RQ-PCR)、免疫印迹(Western blot)、免疫荧光检测Egr-1的表达,观察Egr-1基因的干扰效率.结果 慢病毒载体经玻璃体腔注射途径转染小鼠视网膜后,GFP广泛分布于视网膜全层,包括视网膜色素上皮层.与空白对照组和阴性对照组注射眼比较,RQ-PCR检测显示实验组注射眼Egr-1 mRNA表达明显下调(0.290+0.074比1.006±0.033、1.010±0.086,均P＜0.001),抑制率为71.29%;免疫印迹显示实验组注射眼内Egr-1蛋白表达明显下调(0.224±0.035比0.674±0.050、0.688±0.049,P＜0.001),抑制率为67.44%.免疫荧光检测发现实验组注射眼在视网膜除内核层有少许Egr-1阳性细胞分布外,没有荧光表达.结论 成功构建携带绿色荧光蛋白和靶向干扰Egr-1基因shRNA的慢病毒载体,经玻璃体腔注射转染小鼠眼内其转染效率高,分布范围广,且对小鼠视网膜Egr-1基因抑制效率高.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘双珍	中南大学湘雅医院眼科	140	615	12.0	14.0
2	蒋晶晶	中南大学湘雅医院眼科	9	45	4.0	6.0
3	文丹	中南大学湘雅医院眼科	44	174	8.0	10.0
4	王沙	中南大学湘雅医院眼科	7	2	1.0	1.0