小鼠ERα基因RNA干扰慢病毒载体的构建及其表达鉴定

• 作者: 刘月华 卢芸 李远远
• 来源期刊: 口腔颌面外科杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 雌激素受体α 慢病毒载体 RNA干扰 成肌细胞 鼠
• 年，卷（期）: 2014,（2）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 96-101
• 页数: 6页
• 分类号: Q78
• 字数: 4155字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-4979.2014.02.003

摘要

目的：利用慢病毒载体介导小鼠颏舌肌成肌细胞ERα基因沉默，筛选鉴定后建立ERα基因稳定下调的细胞群。方法：设计合成4组针对小鼠ERα基因的shRNA序列（ERα-321、ERα-693、ERα-978、ERα-1297）及1组阴性对照序列(shNC)，连接到经双酶切处理过的pGLV3/H1/GFP载体上，转染293T细胞包装产生慢病毒。用慢病毒转染体外培养的小鼠颏舌肌成肌细胞，流式细胞仪筛选后提取细胞RNA，RT-PCR法鉴定各组细胞中ERα的RNA干扰效果。结果：细胞转染5种慢病毒后荧光率分别为21.4%、25.1%、30.7%、23.6%和56.4%，经流式细胞仪无菌分选后荧光率接近100%。与阴性对照组相比，4组细胞的ERαmRNA表达均显著降低（P＜0.05），其中ERα-978组的干扰效率最高，为82.7%。结论：本实验成功筛选并建立了ERα基因稳定下调的成肌细胞群，为研究ERα下游信号通路奠定了重要基础。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘月华	同济大学口腔医学院口腔生物医学及转化医学实验室	66	411	12.0	15.0
2	卢芸	同济大学口腔医学院口腔生物医学及转化医学实验室	2	1	1.0	1.0
3	李远远	同济大学口腔医学院口腔生物医学及转化医学实验室	3	6	1.0	2.0