重组hIL-10在毕赤酵母X-33的表达及其生物活性鉴定

• 作者: 孙万邦 宋明英 封建凯 杜联峰 罗军敏 陈富超 黄俊琼
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 人白细胞介素10 毕赤酵母 细胞增殖 淋巴细胞转化试验
• 年，卷（期）: 2011,（8）
• 所属期刊栏目: 分子与细胞免疫学
• 页码范围: 691-695
• 分类号: R392.1
• 字数: 5028字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-484X.2011.08.004

摘要

目的:用毕赤酵母表达hIL-10并探索合适的表达条件,为IL-10生物制品研发及临床应用奠定基础.方法:以0.5%甲醇诱导酵母X-33表达rhIL-10,用SDS-PAGE和Western blot分析鉴定rhIL-10,比较不同温度、不同pH值和有无PMSF条件下rhIL-10的表达水平.用ELISA法测定培养液rhIL-10含量,用Bradford法测定培养液总蛋白含量,计算rhIL-10占总蛋白的比例.以淋巴细胞转化试验分析rhIL-10的生物学活性.结果:SDS-PAGE后可见42 kD左右蛋白条带;Western blot也检测到42 kD左右特异性蛋白质条带.pH值为6.0、温度在28℃并加入抑制剂时rhIL-10表达量最高值为20 mg/L,同时段培养液中总蛋白质含量为50 mg/L,rhIL-10占总蛋白比例为40%.在外周血淋巴细胞转化试验中,rhIL-10抑制了淋巴细胞的增殖.结论:hIL-10能在毕赤酵母高效表达,表达产物有较好生物活性;发酵条件对rhIL-10的表达水平影响大,改善发酵条件能促进rhIL-10的表达.