视黄酸核受体γ重组腺病毒构建及其鉴定

• 作者: 刘友学 张赟 李廷玉 毕杨 江伟 陈洁 魏小平 龚敏
• 来源期刊: 医学分子生物学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 视黄酸核受体γ 重组腺病毒 视黄酸信号转导通路 骨髓间充质干细胞
• 年，卷（期）: 2011,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 283-288
• 分类号: Q782
• 字数: 4734字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3870/j.issn.1672-8009.2011.04.001

摘要

目的 构建携带大鼠视黄酸核受体γ(retinoic acid receptor γ,RARγ)的重组腺病毒,为研究RARγ在骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)成神经分化中的作用奠定基础.方法 体外扩增大鼠RARγ基因,将其定向克隆至腺病毒穿梭质粒pAdTrace-TOX构建重组质粒pAdTrace-RARγ,并在BJ5183菌中与骨架质粒pAdEasy-1重组获得腺病毒载体pAd-RARγ,PacⅠ酶切后转染HEK 293细胞包装腺病毒.腺病毒Ad-RARγ感染大鼠MSCs,Real-time PCR和Western印迹检测 RARγ的表达.结果 PCR,酶切及测序均证实RARγ正确克隆至腺病毒质粒载体中,Ad-RARγ对MSCs感染率达60 %~70 %,并明显增强RARγ基因和蛋白的表达.结论 成功构建携带RARγ的重组腺病毒,并具有上调大鼠MSCs RARγ基因和蛋白表达的功能.