视黄酸核受体α的siRNA重组腺病毒构建及干扰效果初步鉴定

• 作者: 张赟 李廷玉 毕杨 江伟 陈洁 龚敏
• 来源期刊: 解剖学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 视黄酸受体α 小干扰RNA 重组腺病毒 RNA干扰 PC12细胞
• 年，卷（期）: 2012,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 562-566
• 分类号: R977.21
• 字数: 3840字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-1633.2012.05.003

摘要

目的:构建视黄酸核受体α(RARα)的siRNA重组腺病毒,为反向研究RARα受体在全反式视黄酸(ATRA)抗凋亡过程中的作用提供实用的技术手段.方法:设计3对大鼠RARα的siRNA序列,将其分别克隆到pSES-H US穿梭质粒；进而将重组穿梭质粒pSES-HUS-siRARα与pAdEasy-1在BJ5183感受态大肠埃希菌内同源重组以得到pAd-siRARα,Pac I酶切线性化后转染HEK293进行包装扩增以得到重组腺病毒Ad-siRARα；Ad-siRARα感染大鼠PC12细胞48 h,提取各组mRNA和总蛋白,Real-time PCR和免疫印迹检测Ad-siRARα-1、-2、-3对RARα的抑制效率.结果:PCR、酶切及测序均证实RARα的siRNA序列正确克隆至腺病毒质粒载体,经过包装扩增得到大量高滴度重组腺病毒Ad-siRARα,而且对RARα的表达抑制效率接近70％.结论:成功构建视黄酸核受体RARα的siRNA重组腺病毒,并具有下调PC12细胞RARα基因和蛋白表达的功能.