西尼罗病毒NS1蛋白的原核表达及其免疫原性研究

• 作者: 刑福彬 咸庆杰 平芮巾 张丽萍 杨鹏飞 王彦芳 胡孔新
• 来源期刊: 检验检疫学刊
• 学科: 农学
• 关键词: 西尼罗病毒 非结构蛋白NS1 原核表达 免疫原性
• 年，卷（期）: 2011,（3）
• 所属期刊栏目: 出入境检疫
• 页码范围: 34-37,15
• 页数: 5页
• 分类号: S852.65
• 语种: 中文

摘要

[目的]采用大肠杆菌表达系统表达西尼罗病毒NS1蛋白,并对表达产物进行免疫原性分析.[方法]将 WNV NS1 基因克隆入pET30a载体,获得重组表达质粒pE130a - WNV - NS1,并转化入BL21感受态细胞,将表达产物进行 SDS - PAGE 和 Western - blot 分析,经 Ni+ 亲和层析纯化、阴离子交换层析后获得纯化的WNV NS1蛋白;将纯化产物免疫新西兰兔,获得的免疫血清作 ELISA 检测.将重组蛋白包板,检测 FOCUS 公司商品化试剂盒中的阳性血清.[结果](1) 重组 WNV NS1 蛋白获得表达并纯化成功.(2)Westem blot 结果显示表达的蛋白是带有His 标签的目的蛋白.(3)兔免疫血清的间接ELISA结果显示血清效价达到1:50000以上.(4)检测商品化试剂盒中的阳性血清,其OD450吸光值与阴性血清吸光值之比大于2.[结论]重组 NS1 蛋白能在大肠杆菌系统中获得表达;纯化产物具有免疫原性,而且可以作为抗原检测西尼罗病毒感染的血清,为进一步研究 NS1 蛋白的生物学特性及西尼罗病毒的诊断试剂奠定了基础.