人S100A8重组腺病毒质粒的构建及鉴定

• 作者: 周兰 孙双双 徐兰兰 游莉 罗进勇 邹正渝 郭元元 黎玉叶
• 来源期刊: 中国生物制品学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: S100A8蛋白质类 重组腺病毒
• 年，卷（期）: 2011,（3）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 259-262
• 分类号: Q784
• 语种: 中文

摘要

目的 构建人S100A8(hS100A8)重组腺病毒质粒,为hS100A8的深入研究奠定基础.方法 从pGST-hS100A8中扩增hS100A8片段,亚克隆至穿梭质粒pAdTrack-TOX,构建重组穿梭质粒pAdTrack-TOX-hS100A8.经酶切、PCR及测序鉴定,再经Pme I酶切线性化后电转化感受态AdEasier细胞,获得重组腺病毒质粒pAdhS100A8,经Pac I酶切后转染至HEK293细胞进行包装,制备重组腺病毒,扩增后进行病毒滴度测定及RT-PCR和Western blot鉴定.结果 重组穿梭质粒pAdTrack-TOX-hS100A8及腺病毒质粒pAdhS100A8经鉴定均构建正确;重组腺病毒AdhS100A8在HEK293中成功包装,扩增后病毒滴度为1011IU/ml;hS100A8在HEK293细胞中成功表达.结论 成功构建了hS100A8重组腺病毒质粒,为深入研究hSl00A8奠定了基础.