靶向山羊△FosB基因的shRNA重组干扰腺病毒的制备及鉴定

• 作者: 安俊辉 杨振宇 祝珍珍 郑惠玲 闫林慧
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 山羊 △FosB RNA干扰 腺病毒
• 年，卷（期）: 2011,（2）
• 所属期刊栏目: 研究资源
• 页码范围: 381-387
• 分类号: Q344.13
• 字数: 5687字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2011.02.027

摘要

△FosB作为FosB的一种截短型,具有广泛的生物学功能,在脂、钙沉积和药物成瘾等方面有重要作用.本研究采用RNA干扰技术,通过制备重组干扰腺病毒对山羊(Caprar hircus)△FosB基因进行沉默,进一步研究山羊△FosB基因在脂、钙沉积方面的相关功能及作用机制.实验采用BLOCK-iT slaRNA腺病毒干扰系统,将预先设计好的寡聚shRNA-492/572经退火复性后克隆入穿梭质粒pENTR/CMV-GFP/U6中.经干扰效率检测后,选择pENTR/CMV-GFP/U6-572与病毒骨架质粒pAD/PL-DEST进行同源重组,获得重组干扰腺病毒载体pAD/PL-DEST/CMV-GFP/U6-572,并转染HEK-293细胞,经包装、扩增后即可产生干扰腺病毒AD-△FosB-572,TCID50法测定其滴度为1.58x109 PFU/mL.用AD-△FosB-572感染山羊的乳腺上皮细胞(MOI=200),经Western blot及实时定量PCR检测证明在病毒感染24、48和72 h后,山羊乳腺上皮细胞中△FosBmRNA表达量分别下调了45%,73%和81%,其蛋白表达水平也明显下调,干扰效果明显,可用于后续的基因功能研究.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	郑惠玲	西北农林科技大学动物科技学院	28	83	5.0	8.0
2	杨振宇	西北农林科技大学动物科技学院	7	11	2.0	3.0
3	祝珍珍	西北农林科技大学动物科技学院	8	14	3.0	3.0
4	安俊辉	西北农林科技大学动物科技学院	10	14	3.0	3.0
5	闫林慧	西北农林科技大学动物科技学院	4	7	2.0	2.0