博尔纳病病毒磷蛋白的原核表达及纯化

• 作者: 张亮 徐晓艳 房亮 李文娟 谢鹏 邓婧 金戈 马丽华 黄荣忠
• 来源期刊: 中国生物制品学杂志
• 学科: 农学
• 关键词: 博尔纳病病毒 磷蛋白类 原核细胞 基因表达 纯化
• 年，卷（期）: 2011,（10）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1148-1151
• 分类号: S852.65+9.5|Q786
• 语种: 中文

摘要

目的 构建博尔纳病病毒(Borna disease virus,BDV)磷蛋白(p24蛋白)基因重组表达质粒,原核表达p24蛋白,并进行纯化.方法 通过RT-PCR法从BDV感染的少突胶质细胞株(Oligodendrocyte,OL)中扩增p24基因片段,构建重组表达质粒pET-41a-p24,转化大肠杆菌BL21( DE3),IPTG诱导表达,并对表达的重组蛋白进行亲和层析纯化.结果 经双酶切鉴定和测序证实,重组表达质粒pET-41a-p24构建正确；表达的重组p24蛋白相对分子质量约24 000,表达量占菌体总蛋白的30％以上,主要以可溶形式表达；纯化的重组蛋白纯度达85％左右,可与鼠抗BDV p24单克隆抗体特异性结合.结论 已成功原核表达并纯化了重组BDVp24蛋白,为进一步建立BDV相关免疫学检测方法 奠定了基础.