多重PCR检测三种重要食源性致病菌方法的建立及应用

• 作者: 孙振红 朱瑞良 王慧 王新建 盛鹏程 谭燕玲 魏凯
• 来源期刊: 中国农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 奇异变形杆菌 沙门氏菌 单核细胞增生李斯特氏杆菌 多重PCR检测
• 年，卷（期）: 2011,（11）
• 所属期刊栏目: 贮藏·保鲜·加工
• 页码范围: 2334-2340
• 分类号: S858.93
• 语种: 中文
• DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2011.11.016

摘要

[目的]建立快速检测奇异变形杆菌、沙门氏菌和单核细胞增生李斯特氏杆菌3种食源性致病菌的多重PCR方法.[方法]根据奇异变形杆菌尿素酶合成的正向调节因子R基因(ureR)、沙门氏菌侵袭性抗原保守基因(invA)和单核细胞增生李斯特氏杆菌编码溶血素0(LLO)的hlyA基因,分别设计3对特异性引物,对单基因PCR和单管多重PCR扩增的特异性、敏感性分析以及建立L16(43)正交试验对单管多重PCR扩增条件,如引物浓度、Tm值、模板量等的优化,建立快速检测奇异变形杆菌、沙门氏菌和单核细胞增生李斯特氏杆菌的稳定的单管多重PCR方法.[结果]针对奇异变形杆菌、沙门氏菌和单核细胞增生李斯特氏杆菌3种食源性致病菌所设计的3对引物分别能扩增出374、724和215 bp的目的条带,具有高度特异性,反应条件优化后,3种目的菌在103CFU/mL均可同时扩增出较清晰条带(奇异变形杆菌和单核细胞增生李斯特氏杆菌在104CFU/mL浓度下仍然可见到条带),比单基因PCR低一个稀释度,并且人工模拟试验和市售食品试验检测结果稳定.[结论]该方法操作简单、快速、特异性强和灵敏度高,能够实现对奇异变形杆菌、沙门氏菌和单核细胞增生李斯特氏杆菌3种食源性致病菌的快速诊断检测和监控.