人轮状病毒vp4全基因原核穿梭表达质粒的构建及鉴定

• 作者: 刘革力 姜柯安 张璐渝 李世彬 李江 贺志良 马永平
• 来源期刊: 中国生物制品学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 轮状病毒疫苗 vp4 双歧杆菌
• 年，卷（期）: 2011,（10）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1126-1129
• 分类号: R373.2|Q782
• 语种: 中文

摘要

目的 构建人轮状病毒( Rotavirus,RV)vp4全基因原核穿梭表达质粒,经大肠杆菌表达验证后转化入双歧杆菌.方法 从pMD19-T simple-vp4质粒中扩增RV vp4全基因,克隆至pBEX载体中,构建重组表达质粒pBEX-vp4,转化至大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达,经SDS-PAGE和Western blot鉴定后,电转化法将重组质粒转化人双歧杆菌,提取质粒,进行PCR及双酶切鉴定.结果 重组表达质粒pBEX-vp4经酶切、PCR和测序证明构建正确；在大肠杆菌BL21 (DE3)中可表达相对分子质量约87 000的重组VP4蛋白,表达量较低,以包涵体形式表达,可与羊抗人轮状病毒多克隆抗体特异性结合；经PCR及双酶切鉴定,重组质粒pBEX-vp4已成功转入双歧杆菌中.结论 重组表达质粒pBEX-vp4可在大肠杆菌中表达RV VP4蛋白,并可经电转化法有效地将重组表达质粒转化入双歧杆菌,为下一步在双歧杆菌中进行表达及研制基于双歧杆菌表达系统的RV重组亚单位口服活疫苗奠定了基础.