秦川牛天然免疫力相关巨噬细胞蛋白1基因(Nramp1)N端序列的原核表达及纯化

• 作者: 张涌 徐晓彬 李倩 王爱华 陈华涛 靳亚平 马延森
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 天然免疫力相关巨噬细胞蛋白基因1(Nramp1) 原核表达 蛋白纯化 秦川牛
• 年，卷（期）: 2011,（1）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 142-148
• 分类号: S8
• 字数: 6005字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2011.01.021

摘要

为了研究牛天然免疫力相关巨噬细胞蛋白1(Nramp1)的功能,探求转基因抗胞内感染菌牛新材料创制的功能基因,本实验应用RT-PCR方法从秦川牛(Bos taurus)外周血中扩增出Nramp1编码基因N端序列,并将其克隆到pMD18-T simple载体,酶切后连接于pGEX-4T-1表达载体,命名为pGEX-N2.将重组质粒pGEX-N2转化大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3),经IPTG诱导,SDS-PAGE电泳检测GST-Nramp1-N融合蛋白表达,并筛选最佳诱导条件,用谷胱甘肽Sepharose4B介质分离纯化该融合蛋白.结果表明,牛Nramp1 N端编码序列长186 bp,与GenBank中的相应的牛基因序列(U12862.1)对比存在一个碱基差异,致使其编码的第49位氨基酸为丙氨酸.构建的牛Nramp1 N端表达重组质粒pGEX-N2,于35℃、0.1 mmol/L IPTG、诱导10 h,在大肠杆菌中高效表达,表达产物的分子量为33 kD.结果为进一步研究牛Nramp1在机体抵抗胞内菌感染中的作用并为利用该基因进行转基因抗病牛的培育提供了实验依据和实验材料.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李倩	西北农林科技大学动物医学院	20	170	4.0	13.0
2	张涌	西北农林科技大学动物医学院	105	815	13.0	25.0
3	靳亚平	西北农林科技大学动物医学院	73	447	12.0	18.0
4	王爱华	西北农林科技大学动物医学院	23	103	6.0	9.0
5	陈华涛	西北农林科技大学动物医学院	5	10	2.0	3.0
6	徐晓彬	西北农林科技大学动物医学院	2	5	1.0	2.0
7	马延森	西北农林科技大学动物医学院	2	4	1.0	2.0