附睾蛋白酶抑制剂Eppin蛋白的原核表达及纯化

• 作者: 丁新良 张洁
• 来源期刊: 国外医学（医学地理分册）
• 学科: 医学
• 关键词: Eppin 避孕疫苗 原核表达 纯化
• 年，卷（期）: 2011,（2）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 83-86,90
• 分类号: R114
• 字数: 3828字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-8883.2011.02.004

摘要

目的 构建人附睾蛋白酶抑制剂Eppin蛋白的重组质粒pET28a(+)-Eppin,并研究该质粒在原核细胞中的表达及纯化.方法 本研究以人睾丸组织cDNA为模板获得人Eppin基因片段,将其插入pET28a(+)载体His6-Tag上游,构建重组质粒pET28a(+)-Eppin,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达重组人Eppin蛋白后,运用SDS-PAGE进行分析和鉴定.大量表达的重组Eppin蛋白经镍柱亲和层析进行纯化,并采用SDS-PAGE进行纯度分析.结果 PCR扩增出约381 bp的Eppin基因片段,双酶切及PCR鉴定证实Eppin基因成功插入pET28a(+)中,SDS-PAGE分析显示表达产物为分子量单位约为17 ku的重组蛋白,与预期结果一致;Eppin的表达量在IPTG诱导表达4h时最高,约占菌体总蛋白的30%;重组蛋白主要在沉淀中出现,表明原核表达时重组Eppin蛋白以包涵体形式存在;经镍柱纯化后可得纯度高达95%的重组Eppin蛋白.结论 成功构建了人附睾蛋白酶抑制剂Eppin蛋白重组质粒pET28a(+)-Eppin,该质粒在原核系统中获得了高效融合表达,进一步纯化后可得高纯度的重组蛋白,为开展免疫避孕与生殖免疫的研究奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张洁	苏州大学医学部公共卫生学院卫生毒理教研室	42	152	7.0	11.0
2	丁新良	无锡市疾病预防控制中心公共卫生部	12	34	4.0	5.0