应用体外DNA同源重组技术构建pcDNA3.1-NGF和pcDNA3.1-TrkA

• 作者: 张严 彭琬昕 邵根宝 金洁 龚爱华
• 来源期刊: 江苏大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 体外DNA 同源重组 TrkA 神经生长因子 T4 DNA 聚合酶
• 年，卷（期）: 2011,（5）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 390-393,401
• 分类号: R393
• 字数: 3919字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-7783.2011.05.006

摘要

目的:利用体外DNA 同源重组的方法分别构建含神经生长因子(NGF)和神经生长因子受体(TrkA)基因的真核表达载体.方法:在引物5′加上一段与载体克隆位点两端碱基序列相同的序列,PCR扩增目的基因NGF和TrkA,线性载体片段和目的基因片段经T4 DNA 聚合酶的外切产生互补的单链DNA,然后37℃退火实现体外同源重组,转化并鉴定;将重组质粒转染293A细胞,免疫印迹鉴定目的基因的表达情况.结果:成功构建真核载体pcDNA3.1-NGF和pcDNA3.1-TrkA,转染细胞后的表达产物相对分子质量分别是31×103和140×103.结论:与常规重组技术相比,体外DNA 同源重组技术是一种高效的DNA 重组方法,且不需考虑目的片段的限制性酶切位点.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	龚爱华	江苏大学基础医学与医学技术学院	77	261	10.0	13.0
2	金洁	江苏大学基础医学与医学技术学院	34	128	6.0	9.0
3	彭琬昕	江苏大学基础医学与医学技术学院	12	4	1.0	1.0
4	邵根宝	江苏大学基础医学与医学技术学院	34	95	5.0	8.0
5	张严	江苏大学基础医学与医学技术学院	8	23	2.0	4.0