小鼠NMNAT1基因的过表达和RNAi重组慢病毒的构建包装和检测

• 作者: 张惊宇 杨子超 赵虹
• 来源期刊: 浙江大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 慢病毒属 重组,遗传 质粒 遗传栽体 烟酰胺单核苷酸腺苷酰转移酶1 RNA干扰 基因过表达
• 年，卷（期）: 2011,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 622-629
• 分类号: R319
• 字数: 3973字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3785/j.issn.1008-9292.2011.06.009

摘要

目的:针对小鼠烟酰胺单核苷酸腺苷酰转移酶1( NMNAT1)基因构建质粒并进行慢病毒包装,同时检测其表达水平和干扰效率,为进一步探讨该基因的功能提供研究工具和实验基础.方法:根据NMNAT1基因信息,用慢病毒载体pLenti6构建三种重组质粒,分别包含NMNAT1 cDNA全长、一个针对NMNAT1的小干扰序列和一个用于干扰对照的阴性序列.把这些质粒包装进慢病毒载体,并检测病毒滴度,再用慢病毒感染Hela细胞检测NMNAT1表达量和RNA干扰效率.结果:测序结果证明目的序列正确地插入到载体内.通过qPCR方法鉴定慢病毒包装成功,病毒滴度均为2×108 TU/ml以上.表达NMNAT1的重组慢病毒感染Hela细胞,该细胞能够高水平表达NMNAT1蛋白,而携带RNAi序列的慢病毒能够显著抑制其表达,干扰效率在70％以上.结论:针对NMNAT1的过表达和RNAi重组慢病毒制备成功,为进一步研究NMNAT1基因的功能和用慢病毒进行基因治疗提供了良好的研究工具.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨子超	哈尔滨医科大学附属第四医院神经内科	30	95	6.0	8.0
2	张惊宇	哈尔滨医科大学附属第四医院神经内科	28	71	5.0	7.0
3	赵虹	哈尔滨医科大学附属第四医院神经内科	25	47	4.0	6.0