牛源无乳链球菌sip蛋白抗原优势区的原核表达及其间接ELISA检测方法的建立

• 作者: 刘娣 刘燕 史芬芳 吴金花 孙立杰 布日额 郎景民 锡林高娃
• 来源期刊: 中国预防兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 无乳链球菌 sip基因 原核表达 间接ELISA
• 年，卷（期）: 2011,（1）
• 页码范围: 37-40
• 分类号: S852.61
• 字数: 3016字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1008-0589.2011.01.09

摘要

为测定牛源无乳链球菌表面免疫相关蛋白(sip)的抗原性,本实验通过建立间接ELISA方法,对该蛋白的抗原性进行分析及鉴定.根据无乳链球菌sip基因序列,设计一对引物,以临床分离菌株基因组DNA为模板,PCR扩增sip抗原表位优势区编码的基因序列,并将其与原核表达载体pET-30a(+)连接,构建重组质粒pET-sip,转化宿主茵BL21中,经IPTG诱导,获得重组蛋白,western blot分析表明,重组蛋白具有良好的抗原性.以纯化的表达产物作为包被抗原,建立检测无乳链球菌抗体的间接ELISA方法,确定抗原最佳包被浓度为3.125μg/mL,血清最佳稀释度为1:160,酶标二抗最适稀释度为1:4000.应用该方法对无乳链球菌、化脓性链球菌、大肠杆菌和金黄色葡萄球菌兔阳性血清进行检测,结果表明,该方法具有良好的特异性和灵敏度.