植酸酶鼠源多克隆抗血清的制备

• 作者: 孙亚宁 张改平 柴书军 王磊 职爱民 胡骁飞 邓瑞广 邢广旭 魏凤仙
• 来源期刊: 中国农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 植酸酶 Balb/C小鼠 ELISA 多克隆抗血清
• 年，卷（期）: 2011,（3）
• 页码范围: 613-619
• 分类号: S8
• 语种: 中文
• DOI: 10.3864/j.ssn.0578-1752.2011.03.023

摘要

[目的]制备灵敏性高、特异性强的植酸酶多克隆抗体.[方法]将初步纯化的扶皮植酸酶蛋白经凝胶电泳鉴定纯度后,按50μg蛋白/只·次免疫Balb/C小鼠,共免疫4次,每次间隔4周,最后一次免疫60d后,摘眼球取血,制备抗血清.利用间接ELISA方法测定抗血清效价,问接竞争ELISA测定敏感性和特异性.[结果]凝胶电泳的麸皮植酸酶只有一个条带;血清植酸酶抗体效价达1×104;半数抑制浓度达148.87ng.mL(-1).此杭血清对市售的普通微生物植酸酶、市售包被徽生物植酸酶及浓缩的徽生物植酸酶的半数抑制浓度分别达到165.59、163.80和166.51ng.mL(-1),交叉反应率分别为89.85%,90.88%和89.41%.100℃煮沸5min后的麸皮、市售普通徽生物植酸降、市售包被微生物植酸酶及浓缩酶半数抑制浓度分别为2 871.34、5208.85,7914.12和5804.24ng·mL(-1),交叉反应率分别为5.18%,2.86%,1.88%及2.56%.[结论]制备出了具有高效价、高灵敏度和特异性的鼠源植酸酶多克隆抗体,为植酸酶单克隆抗体制备及植酸酶ELISA检测试剂盒研制莫定了墓础.