小鼠可溶性PD1的克隆、真核表达及生物学活性检测

• 作者: 刘朝奇 唐国慧 孙俪 覃晓琳 金羽
• 来源期刊: 生物技术通报
• 学科: 生物学
• 关键词: Fc-PD-1 真核表达 淋巴细胞增殖
• 年，卷（期）: 2011,（2）
• 页码范围: 121-125
• 分类号: Q5
• 字数: 4165字
• 语种: 中文

摘要

旨在克隆小鼠PD1胞外区(简称mPD-1)基因,利用真核表达系统表达有活性的分泌型mPD-1蛋白,初步研究其生物学活性.克隆mPD-1基因,将其连入pcDNA3.1(+)/Fc中获得pcDNA3.1(+).Fc/mPD-1重组表达质粒,转化至大肠杆菌DH5α,进行PCR和双酶切鉴定,并送测序.将阳性质粒转染L929细胞,利用RT-PCR和western blotting 方法鉴定mPD-1/L929稳定表达株.利用Alamar Blue法检测分泌的mPD-1蛋白对淋巴细胞增殖的影响,评价其生物学活性.结果显示,成功构建重组质粒pcDNA3.1(+)-Fc/mPD-1,转染了pcDNA3.1(+)-Fc/mPD-1的L929细胞可将mPD-1蛋白分泌至胞外.Alamar Blue检测结果显示,真核细胞分泌的mPD-1蛋白作用于混合淋巴细胞,与阴性对照相比,可明显促进淋巴细胞的增殖.本试验成功地克隆mPD-1胞外区蛋白,并在L929细胞中得到了分泌型表达.分泌的重组蛋白可有效促进淋巴细胞增殖,为进一步研究其功能和临床应用提供了条件.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘朝奇	三峡大学分子生物学研究所	171	552	10.0	15.0
2	覃晓琳	三峡大学分子生物学研究所	23	62	4.0	7.0
3	孙俪	三峡大学医学院	2	4	2.0	2.0
4	唐国慧	三峡大学医学院	2	4	2.0	2.0
5	金羽	三峡大学化学与生命科学学院	2	4	2.0	2.0