小鼠OAZ2基因的原核表达及抗体制备

• 作者: 何玲 刘梦瑶 王艳林 蔡富强 韩钰
• 来源期刊: 生物技术
• 学科: 生物学
• 关键词: 鸟氨酸脱羧酶抗酶 重叠延伸PCR 原核表达 抗体
• 年，卷（期）: 2011,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 13-16
• 页数: 4页
• 分类号: Q786
• 字数: 3461字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-311X.2011.03.064

摘要

目的:克隆小鼠鸟氨酸脱羧酶抗酶2(OAZ2)功能基因,原核表达、纯化OAZ2蛋白并制备抗OAZ2多克隆抗体.方法:IRT-PCR法从鼠黑色素瘤细胞总RNA中克隆OAZ2 cDNA后,通过重叠延伸PCR技术构建无需移码即可全长翻译的功能基因.将OAZ2功能基因克隆人原核表达载体pET15b并原核表达.表达的蛋白经Ni-NTA亲和层析纯化后,用SDS-PAGE和Western Blot分析鉴定.用纯化的OAZ2蛋白作为抗原免疫Bab/C小鼠以制备多克隆抗体,制备抗体用ELISA和Western Blot检测抗体滴度和特异性.结果:成功获得小鼠OAZ2 cDNA并构建出无需移码翻译的OAZ2功能基因.OAZ2功能基因在大肠杆菌BL21(DE3)中可诱导性高表达并能用Ni-NTA树脂高效纯化.用纯化蛋白免疫Bab/C小鼠制备的抗血清经ELISA检测有较高的多克隆抗体效价(＞1∶64000),经Western blot鉴定可与纯化的OAZ2蛋白质特异性结合.结论:建立了鼠OAZ2蛋白原核表达和纯化技术,制备出高效价和特异性抗OAZ2多克隆抗体,为进一步研究OAZ2基因的功能奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	韩钰	三峡大学分子生物学研究所三峡大学医学院	71	175	7.0	9.0
2	王艳林	三峡大学分子生物学研究所三峡大学医学院	137	424	11.0	16.0
3	何玲	三峡大学分子生物学研究所三峡大学医学院	30	69	4.0	7.0
4	刘梦瑶	三峡大学分子生物学研究所三峡大学医学院	8	9	2.0	2.0
5	蔡富强	三峡大学分子生物学研究所三峡大学医学院	15	8	1.0	2.0