通育粳1号水稻乙醇脱氢酶基因克隆与原核表达

• 作者: 严建萍 梁燕 谭湘陵
• 来源期刊: 生物技术通报
• 学科: 农学
• 关键词: ADH 水稻 克隆 原核表达
• 年，卷（期）: 2011,（3）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 94-96
• 分类号: S5
• 字数: 1811字
• 语种: 中文

摘要

克隆通育粳1号水稻乙醉脱氮酶(alcohol dehydrogenase,ADH)基因,并在原核系统中进行体外表达.取通育粳1号水稻幼根,提取总RNA,RT-PCR法扩增ADH基因开放阅读框架片段,双酶切后连接至pGEX-4T-1表达质粒中.将质粳转化至BL21(DE3)宿主菌中,平皿培养,挑取阳性菌落培养,提取重组质粒,酶切、电泳鉴定播入片段并测定其序列.pGEX4T-1-ADH/BL21进行常规LB扩大培养,IPTG(1 mmoL/L)作用2、3和4h诱导表达,SDS-PAGE检测表达产物.结果显示,插入质粒中的ADH片段序列和方向正确无误,表达蛋白分子量符合预期值42 kD,表达至最大值的诱导时间为3h.因此,该基因的成功克隆和表达为进一步研究水稻中ADH的作用和应用生物工程法大量获得ADH莫定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	谭湘陵	南通大学生物工程研究所	39	222	9.0	12.0
2	严建萍		11	40	5.0	5.0
3	梁燕		11	31	4.0	5.0