狂犬病病毒核蛋白的原核表达及其免疫原性

• 作者: 俞永新 刘景华 吴小红 唐建蓉 曲小肃 曹守春 李加 王玲 石磊泰 董关木
• 来源期刊: 中国生物制品学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 狂犬病病毒 核蛋白 原核细胞 基因表达 免疫原性
• 年，卷（期）: 2011,（4）
• 所属期刊栏目: 预防制品
• 页码范围: 449-451
• 分类号: R373.9|Q786
• 语种: 中文

摘要

目的 原核表达、纯化狂犬病病毒(Rabies virus,RV)核蛋白(Nucleoprotein,NP),并检测其免疫原性.方法 RTPCR扩增RV CVS-11株NP全长基因序列,克隆至原核表达载体pET-30a(+),构建重组原核表达质粒pET-30a-N,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达的重组蛋白经Ni2+柱亲和层析纯化后,进行Western blot分析,并分别以A1(OH)3和CpG1826作为佐剂经腹腔免疫BALB/c小鼠,ELISA法检测小鼠的血清特异性抗体水平.结果 重组原核表达质粒pET-30a-N经双酶切和测序证实构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约51800,表达量约占菌体总蛋白的35%,主要以包涵体形式存在;纯化的重组蛋白纯度达90%以上,可与抗RV小鼠血清特异性结合,分别以A1(OH)3和CpG1826作为佐剂免疫小鼠的血清特异性抗体滴度对数的GMT值(3.81±4-0.22和3.68 4±0.20)明显高于阴性对照组(1.25±0.22),且差异均有统计学意义(P<0.01).结论 已成功表达并纯化了RV NP,其免疫原性良好,为进一步研究其功能奠定了基础.