人CD40基因的克隆及其胞外段的原核有效表达

• 作者: 姜智 张学光 葛彦 陈永井
• 来源期刊: 苏州大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: CD40 RT-PCR cDNA克隆 原核表达
• 年，卷（期）: 2011,（2）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 201-204,212
• 分类号: R392-33
• 语种: 中文

摘要

目的 克隆人CD40基因并原核高效表达其胞外段.方法 采用RT-PCR法,从高表达人CD40抗原的XG-2细胞中扩增CD40全长基因,并将其插入pMD18-T载体中进行测序验证.用特异引物扩增CD40抗原分子的胞外段基因(可溶性CD40、sCD40基因片段),再亚克隆至原核表达载体pGEX-5x-3,将测序正确的重组表达载体转化大肠杆菌B121(DE3),用异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导表达,Western blot检测目的蛋白.结果 RT-PCR能从XG-2细胞总RNA中扩增出特异的目的基因,测序结果显示与GenBank中登录的完全一致,构建的原核表达重组载体pGEX-5x-3/hCD40ECD在表达宿主菌BL21(DE3)中经IPTG诱导能获得有效表达,Western blot证实了目的蛋白条带的特异性.结论 获得了人CD40分子的基因及其胞外段原核表达产物,为进一步研究CD40分子的功能和sCD40的应用奠定了良好的基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张学光	苏州大学生物技术研究所江苏省临床免疫重点实验室	399	1957	18.0	24.0
2	陈永井	苏州大学生物技术研究所江苏省临床免疫重点实验室	78	388	11.0	14.0
3	葛彦	苏州大学生物技术研究所江苏省临床免疫重点实验室	21	100	6.0	9.0