小鼠3D3/LYRIC基因重组质粒构建及蛋白表达和定位

• 作者: 代炜 孙长伏 李妍 李彦姝
• 来源期刊: 中国医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 3D3/LYRIC 腺样囊性癌 AEG-1
• 年，卷（期）: 2011,（8）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 684-687
• 分类号: R782
• 字数: 3310字
• 语种: 中文
• DOI: 21-1227/R.20110726.1659.024

摘要

目的 构建小鼠3D3/LYRIC真核表达载体并证实融合蛋白在细胞内的表达及定位.方法 提取小鼠乳腺上皮细胞系C127的mRNA,反转录为cDNA.PCR扩增m3D3/LYRIC全长编码基因,亚克隆至pEGFP-C1表达载体中.将构建的重组质粒测序并转染到腺样囊性癌细胞系ACC-2中,提取细胞蛋白进行Western blot检测.利用免疫荧光显微镜观察pEGFP-m3D3/LYRIC在腺样囊性癌ACC-2细胞内的定位.结果 m3D3/LYRIC全长基因序列克隆到真核表达载体pEGFP-C1中,酶切鉴定片段大小为1740 bp.Western blot检测到融合蛋白GFP-m3D3/LYRIC表达,分子量约为91 kDa.pEGFP-C1-m3D3/LYRIC主要在细胞质内定位,在细胞核内未见表达.结论 成功构建了m3D3/LYRIC全长基因真核表达载体,pEGFP-m3D3/LYRIC蛋白主要定位于细胞质内.