稳定表达BCR/ABL-T315I的小鼠BP210-T315I细胞株的建立

• 作者: 冯文莉 刘钉宾 史梦 彭智 李亚娟 王海霞 罗红伟 黄世峰
• 来源期刊: 中国生物制品学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 白血病,粒-单核细胞,慢性 融合蛋白质类,bcr-abl 突变 耐药
• 年，卷（期）: 2011,（2）
• 页码范围: 149-152
• 分类号: Q279|Q789
• 语种: 中文

摘要

目的 构建能稳定表达T315I的BCR/ABL的小鼠BP210-T3151细胞株,并观察该细胞株对酪氨酸激酶抑制剂STI571的敏感性.方法 采用PCR法将重组逆转录病毒载体MIGR-P210中的abl基因第944位碱基C定点突变为T,再将该位点突变成功的逆转录病毒载体转染到包装细胞内,收集病毒,感染BaF3细胞,经筛选和亚克隆获得稳定表达T315I的BCR/ABL蛋白的小鼠BP210-T3151细胞.采用RT-PCR、DNA测序和Western blot鉴定abl基因第944位碱基是否发生突变;MTT法检测BP210-T315I细胞对STI571的耐药性.结果 T315I的bcr/abl基因已整合到BaF3细胞基因组中,B210-T315I细胞能稳定表达T315I的bcr/abl基因与蛋白;与BaF3-P210细胞株相比,经STI571处理后,BP210-T315I细胞对STI571明显耐药,其耐药倍数约为100.结论已成功构建稳定表达小鼠T315I的转化细胞株,该细胞株具有对STI571耐药的恶性表型特征.