微量滴定板上的弹性蛋白酶动态显色法检测α1-蛋白酶抑制剂活性

• 作者: 周志军 周雁翔 彭良俊 方亮 李策生 林连珍
• 来源期刊: 中国生物制品学杂志
• 学科: 哲学
• 关键词: α1抗胰蛋白酶 胰弹性蛋自酶 滴定分析法 动态显色法 BCS
• 年，卷（期）: 2011,（2）
• 页码范围: 225-229
• 分类号: B392-33
• 语种: 中文

摘要

目的 建立微量滴定板上的弹性蛋白酶动态显色法(以下简称微量滴定板法),用于α_1-蛋白酶抑制剂(α_1-Pro-teinase inhibitor,α_1-PI)的活性检测.方法 以微量滴定板为载体,将不同量的α_1-PI样品与定量的弹性蛋白酶混合,通过适宜的显色底物对剩余的弹性蛋白酶活性进行测定.用酶标仪测定405nm处A值的变化,分析试验的有效性,并计算α_1-PI样品的活性.优化微量滴定板法的实验条件.用BCS凝集分析仪检测α_1-PI的活性,确认样品的工作浓度.采用两种方法检测19份样品的α_1-PI活性,分析二者的相关性.结果 微量滴定板法的最优实验条件为:样品加样体积50μl,标准曲线范围为(2-14)μg/ml;弹性蛋白酶稀释度为1:1400,体积10μl;孵育时间15min;底物稀释度为1:10,体积50μl;连续监测A_(405)值10min.微量滴定板法和BCS法检测19份样品的相关系数大于0.99.结论 微量滴定板法检测α_1-PI活性的时间更短,同一样品不同稀释度之间检测结果的变异率更低,且检测结果与BCS法相关性良好,可替代全自动的BCS法,降低检测成本.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	周志军	武汉生物制品研究所血液制剂室	20	52	4.0	5.0
2	彭良俊	武汉生物制品研究所血液制剂室	6	8	2.0	2.0
3	李策生	武汉生物制品研究所血液制剂室	12	23	2.0	4.0
4	林连珍	武汉生物制品研究所血液制剂室	3	8	2.0	2.0
5	方亮	武汉生物制品研究所血液制剂室	3	9	2.0	3.0
6	周雁翔	武汉生物制品研究所血液制剂室	2	14	2.0	2.0