人HCN2真核表达载体的构建及在HEK293细胞中的表达

• 作者: 左广锋 徐艳 肖杭 陈绍良
• 来源期刊: 现代生物医学进展
• 学科: 医学
• 关键词: HCN4基因 真核表达载体 转染 异源性表达
• 年，卷（期）: 2011,（6）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1068-1071
• 分类号: R54|Q75|Q78
• 语种: 中文

摘要

目的:构建含有人HCN2基因的真核表达载体.并观察在人胚胎肾细胞(HEK293)中的表达情况.方法:对人HCN2基因全序列进行分析,进行oligo设计,通过PCR,扩增HCN2全长eDNA,通过双酶切(XhoI和BamHI)装入真核表达载体plRES2-EGFP中,脂质体法转染入HEK293细胞中,利用真核表达载体中带有绿色荧光蛋白GFP报告基因,对转染效率进行监测,采用反转录.聚合酶链反应检测HCN2 mRNA 表达,全细胞膜片钳技术检测HCN2通道电流.结果:测序及酶切结果表明HCN2基因正确,荧光显微镜下,转染细胞观察到绿色荧光,反转录-聚合酶链反应检测到HCN2 mRNA 表达,膜片钳检测到hHCN2基因编码的通道电流.结论:成功地构建了HCN2真核表达载体并进行了起搏通道HCN2基因的异源性表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈绍良	南京医科大学附属南京市第一医院心内科	179	956	16.0	23.0
2	左广锋	南京医科大学附属南京市第一医院心内科	2	2	1.0	1.0