pcDNA3.1-HIF-1α重组质粒的构建及其初步鉴定

• 作者: 刘荣福 占鹏程 李博安
• 来源期刊: 中国老年学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: HIF-1α 重组质粒 构建 鉴定
• 年，卷（期）: 2011,（10）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1806-1808
• 分类号: Q291
• 字数: 2741字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-9202.2011.10.041

摘要

目的 探讨HIF-1 α与前列腺癌发病机制之间相关性提供研究工具.方法 采用Trizol法裂解细胞,提取HIF-1 α且以该RNA为模板逆转录为cDNA,然后行PCB处理扩增HIF-1 α基因功能片段区域,克隆至真核表达载体pcDNA3.1上,转化至大肠杆菌DH-5 α,小提质粒,酶切凝胶电泳鉴定,序列测定,经鉴定为正确序列后中抽质粒,采用Fugene试剂转染至前列腺癌细胞PC-3,经G418筛选,建立稳定表达HIF-1 α的前列腺癌细胞系pcDNA3-1-HIF-1 α-PC-3,采用Western印迹鉴定重组质粒的表达.结果 PCR扩增基因片段大小为2.89 kb,克隆至真核载体pcDNA3.1,酶切凝胶电泳可见两个条带,大小大约为5.3 kb和2.89 kb,与预期的大小相符合,序列测定与Cenbank公布的一致,Western印迹验证其在细胞内能表达.结论 重组质粒pcDNA3.1-HIF-1 α能够在前列腺癌PC-3表达,构建成功,为研究HW-1α与前列腺癌提供了一个工具.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李博安	厦门大学生命科学院	5	5	1.0	2.0
2	刘荣福	厦门大学附属第一医院泌尿外科	28	100	6.0	8.0
3	占鹏程		2	0	0.0	0.0