TaqManTM实时荧光PCR快速检测沙门氏菌的初步研究

• 作者: 张朝云 李义 杨纯 汤洪萍 滕毅 陈贤林
• 来源期刊: 现代预防医学
• 学科: 医学
• 关键词: 沙门氏菌 TaqManTM探针 实时荧光PCR 快速检测
• 年，卷（期）: 2011,（23）
• 所属期刊栏目: 实验技术及其应用
• 页码范围: 4927-4929
• 分类号: R378.2+2
• 语种: 中文

摘要

[目的]建立实时荧光TaqManTM检测沙门氏菌的快速检测方法,为食物中毒快速准确的定性检测及食品中沙门氏菌染菌的调查提供手段,也为建立实时荧光TaqManTM同时检测多种细菌性食物中毒目标菌奠定基础. [方法]通过分析沙门氏菌invA、hilA、fimA、hns、spy、hut基因和16S rDNA等目的基因,对比不同目的基因的优缺点,最终选择hut基因作为目的基因,在Genebank进行中查找多条hut基因序列,并利用DNAssist软件进行同源性分析,选取相对保守区段,用Beacon Designer软件自行设计引物和TaqManTM探针,并利用硅胶模型基因组DNA提取法制备基因组DNA,通过对TaqManTM实时荧光PCR缓冲液浓度、Mg2+浓度、dNTP浓度、Taq酶浓度、引物浓度和探针浓度等反应条件的优化,初步建立沙门氏菌的TaqManTM实时荧光PCR快速检测方法. [结果]选取的hut基因同源性达到99％以上,特异性好.通过对各实验条件的优化,得到沙门氏菌TaqManTM实时荧光PCR的最佳反应条件,初步建立TaqManTM实时荧光PCR检测沙门氏菌的快速检验方法,该方法能在1h内完成整个检测过程.[结论]TaqManTM实时荧光PCR检测不但灵敏度高、特异性好,而且检测周期短,能提高沙门氏菌的检出率和检测准确性,可望应用于沙门氏菌食品及食物中毒的快速定性检测.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	滕毅		2	9	1.0	2.0
2	杨纯		2	14	2.0	2.0
3	陈贤林		2	9	1.0	2.0
4	李义		1	9	1.0	1.0
5	汤洪萍		2	9	1.0	2.0
6	张朝云		1	9	1.0	1.0